SRM972a標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)的應(yīng)用—維生素-D及25-羥基維生素-D測定

功能性的維生素-D主要包括維生素-D3和維生素-D2。維生素-D 除了具有傳統(tǒng)意義上的骨骼效應(yīng)，它還有著廣泛的非骨骼效應(yīng)，與心血管疾病、免疫疾病、糖尿病、腫瘤等疾病密切相關(guān)。25-羥基維生素-D（25OHD）測定是衡量維生素-D 營養(yǎng)狀態(tài)的最佳指標(biāo)。根據(jù)測定原理不同，目前 25OHD 的測定方法可分為多種，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS）具有特異性強(qiáng)、準(zhǔn)確性高的特點(diǎn)，被認(rèn)為是評價維生素-D 營養(yǎng)狀況的“金標(biāo)準(zhǔn)"測定法，美國NIST的SRM972a標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)用于測定的校準(zhǔn)品。

通過測定 25OHD 濃度來評價維生素-D 水平，現(xiàn)有多種方法用于臨床 25OHD的測定，根據(jù)方法原理，可分為酶免疫分析法和色譜法。由于所有的維生素-D羥化物都可能發(fā)生抗體抗原結(jié)合反應(yīng)，因此酶免疫分析法只能測定 25OHD 總量，無法同時測定 25OHD2和 25OHD3的濃度?，F(xiàn)有 25OHD 的色譜分析方法包括高效液相色譜法（HPLC）和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS）。由于可分離并檢測不同的分析物，色譜法可區(qū)分并能分別定量 25OHD2和 25OHD3。

色譜法可將 25OHD2、25OHD3與維生素-D其他代謝物實(shí)現(xiàn)有效分離，提高檢測特異性。HPLC 是早期應(yīng)用較多的色譜法之一，可同時檢測 25OHD2和 25OHD3，具有良好的精密度，與 LC-MS/MS 法結(jié)果一致性較好。與免疫法相比，HPLC的相對不確定度小，分析成本更低，甚至還有 HPLC 商業(yè)試劑盒用于 25OHD的測定。但是 HPLC 的不足之處是分析時間長、檢測通量小、靈敏度低、所需樣品量大，不適合臨床應(yīng)用，已經(jīng)*被 LC-MS/MS 所替代。

LC-MS/MS 是色譜法中最為常用的 25OHD 檢測方法，樣品經(jīng)處理后采用液相色譜分離，檢測器為串聯(lián)質(zhì)譜儀，在多反應(yīng)監(jiān)測掃描模式下，實(shí)現(xiàn)分子離子和碎片離子兩次質(zhì)量選擇，可同時檢測 25OHD2和 25OHD3，具有非常高的檢測特異性，被認(rèn)為是“金標(biāo)準(zhǔn)"的檢測技術(shù)。LC-MS/MS 更加契合現(xiàn)代臨床實(shí)驗(yàn)室的工作流程，可*臨床檢測方法準(zhǔn)確性、特異性、檢測通量的要求。25OHD 的 LC-MS/MS檢測方法都是實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部開發(fā)的，不同的實(shí)驗(yàn)室采用不同的標(biāo)準(zhǔn)品來源、貯備液配制、樣品處理方法等，影響了室間可比性。

而采用共同的校準(zhǔn)品、參加英國維生素-D 代謝物室間質(zhì)評計(jì)劃(DEQAS)、美國病理學(xué)家協(xié)會（CAP）的能力測試等措施有助于改進(jìn)方法間、實(shí)驗(yàn)室間測定結(jié)果的可比性：美國標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)研究（NIST）所提供血清 25OHD2和 25OHD3的SRM972a標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)，采用 LCMS/MS 測定靶值。2009 年 DEQAS 有 35 國家、670 家實(shí)驗(yàn)室參加，目前我國尚無相應(yīng)的 25OHD 的室間質(zhì)評計(jì)劃。