SRM998血管緊張素I(美國nist標(biāo)準(zhǔn)品)

SRM998血管緊張素I(美國nist標(biāo)準(zhǔn)品)主要用于腎素測定的校準(zhǔn)和標(biāo)準(zhǔn)化，以及作為氨基酸分析和高效液相色譜法(HPLC)的參考肽。

SRM 998的一個單位由0.5 mg化學(xué)合成的血管緊張素Ⅰ組成。

經(jīng)認(rèn)證的血管緊張素Ⅰ純度值通過HPLC進(jìn)行評估，并通過核磁共振(NMR)在報告的不確定性范圍內(nèi)間接確認(rèn)。在HPLC程序中，肽含量通過標(biāo)準(zhǔn)添加法測量，使用溶解在1 mol/LKOH 中的苯丙氨酸作為添加標(biāo)準(zhǔn)。SRM溶液和添加的標(biāo)準(zhǔn)溶液在6 mol/LHCl中水解并測定氨基酸組成。苯丙氨酸濃度通過絕對重量和通過測量標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度并使用表觀比摩爾吸光度209±0.2L/gcm 計算濃度來確定。苯丙氨酸與四種氨基酸（緬氨酸、亮氨酸、組氨酸和精氨酸）中每一種的濃度比用于計算每個樣品中總肽的量。所有報告的不確定度均表示為所列值的正負(fù)一個標(biāo)準(zhǔn)誤差。參考醋酸鹽含量值由單—方法確定。

SRM998血管緊張素I(美國nist標(biāo)準(zhǔn)品)應(yīng)存放在-20°C的密封玻璃安瓿中，在打開前應(yīng)允許加熱到房間溫度。

該材料是從貝克曼儀器公司，生物產(chǎn)品業(yè)務(wù)(帕洛阿爾托，加利福尼亞州)。

使用在 5000 kPa 壓力下操作的 25 cm x0.4 cm 十八烷基硅烷柱對溶解的 25 ug 該 SRM 998  血管緊張素I  標(biāo)準(zhǔn)品樣品進(jìn)行液相色譜分析。樣品已溶解在 8l 體積份 0.l molL 三乙胺磷酸鹽緩沖液（pH 3.5）和 19 體積份乙腈溶液中。使用了兩種溶液：一種是用于溶解 SRM 的相同成分的溶液；另一種是用于溶解 SRM 的溶液。另一種是75體積份緩沖液與25體積份乙腈的溶液。通過在 215 nm 和 280 nm 處測量吸光度來監(jiān)測洗脫。在 81:19 的洗脫液比下，在 2l5 nm 處檢測到保留時間分別為 16.6 minutcs 和 12.2 min 的主峰和次峰，在 280 nm 處僅檢測到主峰。每個峰對應(yīng)的物質(zhì)為收集，在 6 molL HCl 中水解并分析氨基酸組成。主峰的氨基酸含量表明它是血管緊張素 I。次峰（<1% 的 215 nm 吸光度）不含可檢測到的肽材料。在這些 HPLC 條件下，乙酸鹽聚集在溶劑前沿并且無法定量。在 75:25 的洗脫液比例下，在該波長處未檢測到額外的峰，表明不存在非肽、UV 吸收材料。

用4 0 0 MHz核磁共振波譜儀在脈沖傅里葉變換模式下測定了6種SRM樣品的乙酸含量。用整個樣品(約0.5mg)在0.5mL氧化氘(100原子%D)中溶解，制備了分析溶液。在Cach溶液中加入少量的鈉-4，4-二甲基-4-硅戊酸酯2，2，3，3-DS作為內(nèi)參。由于在8.1.922處發(fā)現(xiàn)乙酸甲酯質(zhì)子信號與血管緊張素l的質(zhì)子信號重疊，因此血管緊張素Ⅰ的一種乙酰丙酮法初步準(zhǔn)備用于確定乙酸酯峰下信號的準(zhǔn)確質(zhì)子計數(shù)。用0.02 mol HCl對該樣品進(jìn)行了兩次凍干處理，結(jié)果表明，該樣品不含乙酸酯，其光譜感興趣區(qū)為3個。在此基礎(chǔ)上，對THC SRM樣品進(jìn)行了不凍干分析，從縮醛甲基峰及其信號的總積分中減去三個質(zhì)子的適當(dāng)積分值，得到乙酸峰的積分。三個質(zhì)子積分的適當(dāng)值是通過在高能量區(qū)總共29個質(zhì)子信號的積分平均值確定的，其中包括許多源自血管緊張素l的甲基、甲基和甲基質(zhì)子的質(zhì)子信號。質(zhì)子信號的數(shù)字積分用圖表紙繪制，并進(jìn)行了處理。使用下列儀器參數(shù)：數(shù)據(jù)集的大小，16384點(diǎn)；4 US(30°翻轉(zhuǎn)角)；光譜寬度，4 kHz，掃描次數(shù)，2000年；弛豫延遲，1.95秒。