NIBSC93/722白介素10試劑盒的使用方法

　　NIBSC93/722白介素10是由160個氨基酸組成4個α螺旋結(jié)構(gòu)的的細(xì)胞因子，分子量為18.5 kDa。在水溶液中以二聚體形式存在，分子量約為39 kDa。是個多效性的因子，能夠?qū)Χ喾N細(xì)胞起作用，主要表現(xiàn)為免疫抑制和免疫刺激兩方面的作用，特別是在調(diào)節(jié)淋巴系和髓系的細(xì)胞功能方面扮演重要的作用。IL-10 也具有單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞依賴、抗原刺激引起的的PBMNC 和 NK 細(xì)胞合成其它細(xì)胞因子的抑制作用。巨噬細(xì)胞膜介導(dǎo)的共刺激引起的T細(xì)胞和NK細(xì)胞活化后的產(chǎn)物及功能也可被IL-10所抑制。

 

　　IL-10是單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞功能的強(qiáng)有力的調(diào)節(jié)物。IL-10作為細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)的抑制物，能夠抑制像前列腺素E2、TNF-α、IL-1、IL-10和 IL-8等許多引起炎癥的細(xì)胞因子。IL-10 能夠促進(jìn)可溶性TNF受體的釋放和ICAM－1和B7在細(xì)胞表面的表達(dá)。IL-10還參與B細(xì)胞、柱狀細(xì)胞及胸腺細(xì)胞的增殖和分化的調(diào)控。

 

　　NIBSC93/722白介素10劑盒采用雙抗體夾心ELISA法檢測樣本中IL-10 的濃度。IL-10 捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)本或參考品時，其中的IL-10 會與捕獲抗體結(jié)合，其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。當(dāng)加入生物素化的抗人IL-10 抗體后，抗人IL-10 抗體與IL-10 接合，形成夾心的免疫復(fù)合物，其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。隨后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的親合素。

 

　　生物素與親合素特異性結(jié)合，親合素連接的酶就會與夾心的免疫復(fù)合物連接起來；其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。加入顯色劑，若樣本中存在IL-10 將會形成免疫復(fù)合物，辣根過氧化物酶會催化無色的顯色劑氧化成藍(lán)色物質(zhì)，在加入中止液后呈黃色。通過酶標(biāo)儀檢測，讀其450nm處的OD值，IL-10 濃度與OD450值之間呈正比，通過參考品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對照未知樣本中OD值，即可算出標(biāo)本中IL-10 濃度。